PALM-Mikroskopie
PALM imaging, PALM-Methode, Einzelmolekül-Bildgebung, Einzelmolekül-Detektion, SMLM, Einzelmolekül-Mikroskopie
Die photoaktivierte Lokalisationsmikroskopie (PALM) ist eine hochauflösende Bildgebungstechnik, die durch Ausnutzung der Eigenschaften photoaktivierbarer Fluorophore eine Auflösung im Nanometerbereich erreicht und so räumliche Details dicht gepackter Moleküle sichtbar macht.
Mit dieser Methode lassen sich einzelne Moleküle wie Proteine im zellulären Kontext nachweisen. Das Verfahren bietet eine hohe Detailgenauigkeit bei der Darstellung von 3D-Strukturen in Zellkörpern und funktioniert wie folgt: Durch die Bestrahlung von Fluorophoren mit aktivierenden Lasern geringer Leistung und einer bestimmten Wellenlänge kommt es zu einer Veränderung ihres Emissionsspektrums. Diese Umwandlung erfolgt stochastisch, sodass nur wenige Fluorophore in ihren aktiven Zustand übergehen. Die stochastische Anregung der Fluorophore stellt sicher, dass jeder Fluoreszenzpunkt von einem einzigen Fluorophor stammt. Ein leistungsstarker Laserstrahl belichtet diese aktivierten Moleküle kurz, woraufhin sie sofort in ihren inaktiven Zustand zurückkehren (z. B. durch Photobleaching). Dieser Vorgang wird dann über Tausende von Bildern wiederholt und die Bilder werden zu einem hochauflösenden Bild zusammengefügt.